一、常見誤區(qū)
忽視對照設(shè)置:未設(shè)置陰性對照(如空白樣本)或陽性對照(已知陽性樣本),導(dǎo)致無法判斷背景信號或試劑盒靈敏度,易將非特異性信號誤判為陽性。
樣本處理不當:細胞裂解不充分、固定時間過長或未洗滌,可能殘留雜質(zhì)或干擾物質(zhì),影響檢測信號準確性(如熒光背景升高)。
結(jié)果判讀主觀化:依賴肉眼觀察顏色變化或熒光強度,未使用標準比色卡或定量分析工具(如酶標儀、流式細胞儀),導(dǎo)致結(jié)果重復(fù)性差。
忽略臨界值范圍:將弱陽性結(jié)果直接判定為陰性或陽性,未結(jié)合試劑盒提供的臨界值(Cut-off值)或參考范圍,增加假陽性/假陰性風(fēng)險。
交叉反應(yīng)干擾:樣本中存在與目標抗原結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)(如其他細胞因子或同源蛋白),未通過特異性驗證試驗(如Westernblot)排除非特異性結(jié)合。
二、正確分析方法
嚴格對照實驗:每批次檢測需包含陰性對照、陽性對照及空白對照,確保試劑盒性能穩(wěn)定且無污染。
標準化樣本處理:遵循試劑盒說明書優(yōu)化裂解、固定、洗滌步驟,例如使用預(yù)冷緩沖液、控制離心速度與時間,減少操作變異。
定量結(jié)果分析:采用酶標儀、流式細胞儀或qPCR等定量設(shè)備讀取信號,結(jié)合標準曲線或熒光閾值(Ct值)計算目標物質(zhì)濃度,避免主觀判讀誤差。
綜合臨界值判斷:根據(jù)試劑盒提供的臨界值范圍(如OD值≥0.2為陽性),結(jié)合樣本重復(fù)檢測結(jié)果(如3次平行試驗)綜合判定,弱陽性樣本需進一步驗證。
交叉反應(yīng)驗證:對可疑結(jié)果進行特異性驗證,如通過免疫沉淀、基因編輯敲除目標蛋白等方法確認信號來源,排除非特異性干擾。
通過規(guī)范操作流程、結(jié)合定量分析與對照實驗,可顯著提升細胞檢測試劑盒結(jié)果的準確性,為科研與臨床診斷提供可靠依據(jù)。